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Formation - HPLC préparative appliquée à la purification de peptides

RESPONSABLES

Pascal VERDIE

Ingénieur de recherche

UMR 5247

Luc BRUNEL

Ingénieur d'études

UMR 5247

LIEU

MONTPELLIER (34)

ORGANISATION

14 h
de 4 à 6 stagiaires

MÉTHODES PÉDAGOGIQUES

Alternance de cours (7 h) et de TP/TD (7 h).
Test d'évaluation en fin de formation.
Un support papier et un fichier au format PDF seront mis à disposition du stagiaire.

COÛT PÉDAGOGIQUE

1326 Euros

A L'ISSUE DE LA FORMATION

Evaluation de la formation par les stagiaires. Envoi d'une attestation de formation.

DATE DU STAGE

Nous consulter

2025
Janvier Février Mars Avril
Mai Juin
25150
Juillet Août
Sept Oct Nov Déc
OBJECTIFS
-

Comprendre les phénomènes chromatographiques mis en jeu pendant l'analyse pour optimiser le protocole de purification


-

Transposer le changement d'échelle (de l'analytique vers la préparative)


-

Mettre en ?uvre une purification par HPLC préparative en phase inverse

PUBLIC
Ingénieurs, techniciens, utilisateurs de la technique de chromatographie en phase liquide
PRÉREQUIS
Niveau Bac + 2 minimum en chimie ou en biologie. Connaissances de base en HPLC
PROGRAMME
JOUR 1
9h00 - 12h30 - Formation théorique (3h30) COURS
- Principes généraux : comprendre les phénomènes mis en jeux en chromatographie
- Silices greffées : fabrication, état du marché, apprendre à choisir le bon support
- Grandeurs fondamentales : définitions, apprendre à les calculer
- Facteurs influençant les purifications : temp ; nature des éluants (compo et pH), géométrie colonne, volume d'injection, charge, type de greffage

13h30 -17h00 - Méthodologie (3h30) COURS
- Préparation de l'échantillon
- Détermination des paramètres chromatographiques
- Exemple d'étude méthodologique : pH-temps d'élution-estimation de la quantité à purifier-écriture de méthode
- Les bonnes pratiques et erreurs à éviter
- Exercices d'application à effectuer en autonomie

JOUR 2
9h00 - 12h30 - Travaux pratiques / Travaux dirigés (3h30)
- Détermination expérimentale du volume mort et du volume délai (3 injections)
(1 injection sans colonne de 200µl de DMSO à 100% de voie A - 1 injection avec colonne de 200µl de DMSO à 100% de voie A - 1 élution de 10 minutes voie A (ACN) et voie B (ACN+5% Acétone)
- Déterminer par le calcul tous les paramètres chromatographiques (Débit optimal - volume retard - temps retard - quantité de silice - volume d'injection - temps réel d'élution - % réel d'élution)
- Détermination graphique du % d'élution observé estimé du composé ciblé
- Déterminer le gradient de purification
- Ecriture de la méthode sur l'appareil
- Estimer le temps de rétention en mode préparatif.

13h30-17h00 - Travaux pratiques / Travaux dirigés (3h30)
- Mise en ?uvre de la purification et description des fonctionnalités
- Corrections des exercices d'application
- Test d'évaluation
EQUIPEMENTS
Instruments LC-DAD-MS des sociétés Agilent (1260-6100)
HPLC préparative de la société Gilson (PLC 2250)
INTERVENANT
L. Brunel (ingénieur d'études)