L'organisme de formation continue du CNRS
Accueil > HPLC préparative appliquée à la purification de peptides

Formation - HPLC préparative appliquée à la purification de peptides

RESPONSABLES

Pascal VERDIE

Ingénieur de recherche

UMR 5247

Luc BRUNEL

Ingénieur d'études

UMR 5247

LIEU

MONTPELLIER (34)

ORGANISATION

14 h
de 4 à 6 stagiaires

MÉTHODES PÉDAGOGIQUES

Alternance de cours (7 h) et de TP/TD (7 h).
Test d'évaluation en fin de formation.
Un support papier et un fichier au format PDF seront mis à disposition du stagiaire.

COÛT PÉDAGOGIQUE

1326 Euros

A L'ISSUE DE LA FORMATION

Evaluation de la formation par les stagiaires. Envoi d'une attestation de formation.

DATE DU STAGE

25150 : du mardi 03/06/2025 au mercredi 04/06/2025 à MONTPELLIER

2025
Janvier Février Mars Avril
Mai Juin
25150
Juillet Août
Sept Oct Nov Déc
OBJECTIFS
-

Comprendre les phénomènes chromatographiques mis en jeu pendant l'analyse pour optimiser le protocole de purification


-

Transposer le changement d'échelle (de l'analytique vers la préparative)


-

Mettre en ?uvre une purification par HPLC préparative en phase inverse

PUBLIC
Ingénieurs, techniciens, utilisateurs de la technique de chromatographie en phase liquide
PRÉREQUIS
Niveau Bac + 2 minimum en chimie ou en biologie. Connaissances de base en HPLC
PROGRAMME
JOUR 1
9h00 - 12h30 - Formation théorique (3h30) COURS
- Principes généraux : comprendre les phénomènes mis en jeux en chromatographie
- Silices greffées : fabrication, état du marché, apprendre à choisir le bon support
- Grandeurs fondamentales : définitions, apprendre à les calculer
- Facteurs influençant les purifications : temp ; nature des éluants (compo et pH), géométrie colonne, volume d'injection, charge, type de greffage

13h30 -17h00 - Méthodologie (3h30) COURS
- Préparation de l'échantillon
- Détermination des paramètres chromatographiques
- Exemple d'étude méthodologique : pH-temps d'élution-estimation de la quantité à purifier-écriture de méthode
- Les bonnes pratiques et erreurs à éviter
- Exercices d'application à effectuer en autonomie

JOUR 2
9h00 - 12h30 - Travaux pratiques / Travaux dirigés (3h30)
- Détermination expérimentale du volume mort et du volume délai (3 injections)
(1 injection sans colonne de 200µl de DMSO à 100% de voie A - 1 injection avec colonne de 200µl de DMSO à 100% de voie A - 1 élution de 10 minutes voie A (ACN) et voie B (ACN+5% Acétone)
- Déterminer par le calcul tous les paramètres chromatographiques (Débit optimal - volume retard - temps retard - quantité de silice - volume d'injection - temps réel d'élution - % réel d'élution)
- Détermination graphique du % d'élution observé estimé du composé ciblé
- Déterminer le gradient de purification
- Ecriture de la méthode sur l'appareil
- Estimer le temps de rétention en mode préparatif.

13h30-17h00 - Travaux pratiques / Travaux dirigés (3h30)
- Mise en ?uvre de la purification et description des fonctionnalités
- Corrections des exercices d'application
- Test d'évaluation
EQUIPEMENTS
Instruments LC-DAD-MS des sociétés Agilent (1260-6100)
HPLC préparative de la société Gilson (PLC 2250)
INTERVENANT
L. Brunel (ingénieur d'études)