Formation - PCR quantitative en temps réel

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Environnement scientifique et technique de la formation

Institut de chimie des substances naturelles

- UPR 2301

RESPONSABLES

Eric JACQUET

Chargé de recherche

UPR 2301

Naima NHIRI

Ingénieure de recherche

UPR 2301

LIEU

GIF-SUR-YVETTE (91)

ORGANISATION

34 h
De 4 à 6 stagiaires

MÉTHODES PÉDAGOGIQUES

Alternance de cours (5H), de travaux dirigés (15H) et de travaux pratiques (14H).
TD et TP en sous-groupe de 2 ou 3 stagiaires maximum avec un intervenant par sous-groupe.
Des supports papier ainsi que des fichiers aux format PDF et Excel seront mis à disposition des stagiaires.
Tout au long de la formation, des cas pratiques ou exercices corrigés permettront à l'apprenant d'évaluer l'acquisition des compétences.

COÛT PÉDAGOGIQUE

2040 Euros

A L'ISSUE DE LA FORMATION

Evaluation de la formation par les stagiaires
Envoi d'une attestation de formation

DATES DES SESSIONS

Les informations indiquées pour cette page sont valables pour la première session à venir.
Avant de s'inscrire à une autre session, téléchargez son programme car des modifications mineures peuvent y avoir été apportées.

25237 : du lundi 10/03/2025 au vendredi 14/03/2025 à GIF-SUR-YVETTE

25300 : du lundi 16/06/2025 au vendredi 20/06/2025 à GIF-SUR-YVETTE

25301 : du lundi 03/11/2025 au vendredi 07/11/2025 à GIF-SUR-YVETTE

2025

Janvier	Février	Mars 25237	Avril
Mai	Juin 25300	Juillet	Août
Sept	Oct	Nov 25301	Déc

OBJECTIFS

Acquérir les connaissances théoriques permettant la réalisation d'un projet de PCR quantitative

Maîtriser les différentes étapes pratiques nécessaires au projet de qPCR, de l'extraction des acides nucléiques au traitement des données

Identifier les points critiques pour la bonne réalisation d'un projet de qPCR

PUBLICS

Chercheurs, ingénieurs et techniciens

Afin d'adapter le contenu du stage aux attentes des stagiaires, un questionnaire téléchargeable devra être complété et renvoyé au moment de l'inscription.

PRÉREQUIS

Avoir une expérience des techniques de biologie moléculaire

PROGRAMME

Cours et travaux dirigés
- Principes de la PCR et de la PCR quantitative en temps réel, choix des amorces, choix de la technique et des fluorophores utilisés. Notion de Ct, calcul de l'efficacité, résolution des problèmes de spécificité et de sensibilité
- Principes de la qPCR absolue ou relativee
- Sélection des gènes de référence et méthode de normalisation, utilisation des logiciels geNorm et NormFinder
- Analyses des données de qPCR, courbes de fluorescence, limite de Ct, réplicats techniques, calcul des
variations d'expression, méthode Δ Δ Ct
- qPCR en microplaque, carte microfluidique et nanovolumes
- Normes MIQE

Travaux pratiques
- Broyage, extraction, purification des ARN
- Dosage et contrôle qualité des ARN
- Contrôle de la non-contamination des ARN par qPCR
- Etape de transcription inverse
- Contrôle qualité des cDNA par qPCR
- Utilisation d'amorces pour qPCR sybrGreen et/ou TaqMan
- Utilisation de dilutions en série pour la réalisation de gamme de qPCR
- qPCR en microplaque et carte microfluidique
- Calculs et résultats en quantification absolue et en quantification relative, calcul des efficacités, stabilité des gènes de référence utilisés, calcul des variations d'expression

EQUIPEMENTS

Broyeur Precellys, Qiacube Qiagen, Nanodrop, Qubit, Bioanalyzer Agilent, TapeStation Agilent, PCR Master cycler Eppendorf, robot EpMotion 5075, qPCR StepOnePLus, qPCR QuantStudio.
Il est conseillé de venir avec son propre ordinateur portable et de se munir d'une blouse de laboratoire.

INTERVENANTS

E. JACQUET (chargé de recherche) et N. NHIRI (ingénieure de recherche)

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