Formation - Purification de protéines : principes et méthodes

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Environnement scientifique et technique de la formation

Institut de biologie intégrative de la cellule

- UMR 9198

RESPONSABLES

Valérie CAMPANACCI

Ingénieure de recherche

UMR 9198

Mélanie CHENON

Ingénieure d'études

UPR 4301

LIEU

GIF-SUR-YVETTE (91)

ORGANISATION

25 h
De 3 à 8 stagiaires

MÉTHODES PÉDAGOGIQUES

Liste des ressources pédagogiques : un support papier et des fichiers numériques seront mis à disposition du stagiaire (clé USB et/ou accès à un site sécurisé de téléchargements).
En fin de formation, un test d'auto-évaluation d'acquisition des connaissances sera effectué et une correction collégiale commentée permettra à l'apprenant de se positionner sur l'atteinte des objectifs de la formation.

COÛT PÉDAGOGIQUE

1808 Euros

A L'ISSUE DE LA FORMATION

Evaluation de la formation par les stagiaires
Envoi d'une attestation de formation

DATE DU STAGE

25232 : du lundi 19/05/2025 au jeudi 22/05/2025 à GIF-SUR-YVETTE

2025

Janvier	Février	Mars	Avril
Mai 25232	Juin	Juillet	Août
Sept	Oct	Nov	Déc

OBJECTIFS

Distinguer les différentes techniques de chromatographie pour la purification des protéines.

Sélectionner et mettre en ?uvre la (les) méthode(s) appropriée(s) pour la purification de protéines d'intérêt.

Utiliser des automates pour la purification des protéines.

Estimer la qualité et doser les protéines purifiées

PUBLIC

Techniciens, ingénieurs, chercheurs souhaitant surproduire des protéines en vue d'études biochimiques, biophysiques et/ou structurales.

PRÉREQUIS

Connaissances de base en biochimie des protéines
Les moins initiés pourront suivre le stage "Production et analyse de protéines recombinantes" avant de participer à ce stage.
Formation dispensée en français.

PROGRAMME

Cette formation de 3,5 jours débute par un cours théorique sur les protéines, leurs structures, leurs caractéristiques, les différentes méthodes pour les surexprimer et les purifier. Des ateliers pratiques permettront aux stagiaires de purifier une protéine par différentes stratégies à l'aide d'automates. Pendant la formation, du temps sera consacré à des discussions avec les stagiaires autour des problématiques qu'ils rencontrent ou ont rencontrées dans la production/purification de protéines et des solutions possibles à envisager.

Cours (7 h)
- Introduction à la purification de protéine
- Structure des protéines : de l'acide-aminé à la structure quaternaire
- Caractérisation bio-informatique de sa protéine d'intérêt : exemple d'analyse
- Production de sa protéine d'intérêt : les différents systèmes hétérologues ; vecteurs, étiquettes ; conditions d'expression ; tampons et techniques de lyse
- Les différentes méthodes de purification : selon la solubilité, l'hydrophobicité, la charge, la taille
- Mise en situation avec un cas concret
- Présentation des automates de purification

Travaux pratiques (18 h)
- Lyse des bactéries
- Purification sur automate d'une protéine recombinante à partir d'un culot bactérien par 2 stratégies différentes
- Suivi de la purification par gel de polyacrylamide en conditions dénaturantes (SDS-PAGE) et Western-blot
- Dosage de la protéine purifiée par la méthode de Bradford et par spectrométrie UV
- Analyse des résultats et bilan

EQUIPEMENTS

3 automates de purification (2 AKTA Pure et 1 AKTA Purifier, Cytiva).
1 spectrophotomètre Varian Cary 50.

INTERVENANTS

V. Campanacci et M. Chenon (ingénieures)

Avis des stagiaires

"Très complète, formation intéressante ; très bonne présentation aussi bien la partie théorique et pratique. Je recommande vivement pour les personnes qui débutent dans la purification des protéines. Merci aux intervenantes." Hemalatha N., Organisme de recherche

"J'ai vraiment beaucoup apprécié cette formation. Elle m'a permis de voir les différentes techniques de purification. Les explications étaient très intéressantes et les discussions enrichissantes" Julie CHENU-BALIGAND, BIO-RAD

"Formation très riche en échanges tout aussi pratique que théorique. Les intervenants on pris le temps pour les explications et s'adaptent au niveau de chaque personne. Formation excellente ! " Anonyme, CNRS

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