Formation - Cytométrie en flux : avantages et limites de la cytométrie conventionnelle et spectrale

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Environnement scientifique et technique de la formation

Fédération de recherche agrobiosciences interactions et biodiversité

- FR 3450

RESPONSABLE

Emmanuelle NASER

Ingénieur d'études

UMR 5089

LIEU

TOULOUSE (31)

ORGANISATION

14 h
8 stagiaires maximum

MÉTHODES PÉDAGOGIQUES

Des supports papier et/ou dématérialisés seront remis aux participants à l'issue de la formation.
Tout au long de la formation, des exercices corrigés permettront au stagiaire d'évaluer son acquisition des connaissances.

COÛT PÉDAGOGIQUE

2000 Euros

DATE DU STAGE

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NOUVEAU

OBJECTIFS

Appliquer les principes de chaque technologie (conventionnelle et spectrale)

Analyser les apports et le limites de chaque technologie

Utiliser un cytomètre conventionnel (BD Fortessa) et un cytomètre spectral (Northern Lights)

PUBLIC

Chercheurs, ingénieurs et techniciens exerçant dans le domaine des sciences du vivant.

PRÉREQUIS

Connaissances et pratique de base sur l'analyse par cytométrie en flux multi-couleurs.

PROGRAMME

Cette formation permet aux stagiaires d'acquérir et d'identifier les apports et les limites de la cytométrie conventionnelle et de la cytométrie spectrale.

Jour 1 (matin) : présentation générale des deux technologies : principes, avantages et limites
- Présentation du principe de fonctionnement d'un cytomètre en flux en détaillant les similitudes et différences d'acquisition
- Traitement du signal en fonction des deux approches : les compensations entre fluorescences et la déconvolution des spectres

Jour 1 (après-midi) : présentation des bonnes pratiques :
- Panel design : présentation d'un workflow pour concevoir des panels multi-couleurs en cytométrie conventionnelle et spectrale
- Contrôles et standardisation : présentation de l'importance de la titration des anticorps, des contrôles expérimentaux et de marquages. Puis seront abordés les paramètres à l'optimisation des expériences. On présentera ensuite la standardisation à réaliser sur des expérimentations de longue durée (semaines, mois, années)

Jour 2 (matin) : acquisition d'échantillons pour un panel de 12 couleurs en cytométrie conventionnelle et en cytométrie spectrale :
- Acquisition des contrôles des tubes expérimentaux sur les deux technologies
- Compensation/ Unmixing-Spillover, soustraction de l'auto fluorescence

Jour 2 (après-midi) : présentation des analyses sur les différentes données acquises

La partie théorique est réalisée en cours magistral à l'aide d'une présentation remise aux participants lors de la formation. La partie pratique est réalisée par sous-groupes de 4 stagiaires encadrés par deux intervenantes, sur deux cytomètres (BD Fortessa et Cytek Aurora/Northern Lights), avec des échantillons préparés au préalable.

EQUIPEMENTS

Cytomètre BD Fortessa avec le logiciel d'analyse DIVA
Cytomètre Cytek Northern Lights avec le logiciel SpectroFlo

INTERVENANTS

V. DUPLAN-ECHE (ingénieure de recherche), M. FARCE, A.-L. ISCACHE, E. NÄSER, M.-L. RENOUD et E. RIANT (ingénieures d'études)

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